Микроскопический метод исследования

Что нужно для микроскопического метода исследования?

Микроскоп, красители и приготовление препаратов.

1. Освоить правила обращения с микроскопом.

2. Изучить приемы приготовления красящих растворов.

3. Приготовление препаратов.

Оборудование и материалы: микроскопы (по одному на учащегося); сухие красители (основной фукцин, сафранин, генциаквиолет, метиленовая синь и спиртовые их растворы); одна бактериологическая петля, спираль, флакон с кедровым маслом, три листка фильтровальной бумаги, набор красящих растворов, банка с обезжиренными предметными стеклами и восковой карандаш (из расчета на учащегося); пробирки с суспензией стафилококка, стрептококка, сарцины, кишечной палочки и сенной палочки; стеклянные банки с 2%-ным раствором фенола; таблица (расположение и формы микроорганизмов).

Освоение правил обращения с микроскопом. Микроскоп обычный световой, имеет штатив, подвижной столик, макроскопический винт, микроскопический винт, зеркало, конденсор с ирисовой диафрагмой, окуляры и объективы со слабым, средним и сильным увеличением (рис. 5). Объектив с сильным увеличением называется иммерсионным, так как для исследования с его помощью для лучшей видимости микроорганизма на препарат наносят каплю иммерсионного (кедрового) масла. Объектив опускают в иммерсионное масло и исследуют. На окулярах и объективах имеются цифры. Общее увеличение микроскопа определяют умножением показателя увеличения поставленных в рабочее положение окуляра и объектива.

 

Рис. 5. Микроскоп МБР-1: 1 — башмак; 2 — макрометрический винт; 3 — коробка с микромеханизмом; 4 — тубусодержатель; 5 — головка тубусодержателя; 6 — монокулярный тубус; 7 — окуляр; 8 — винт для крепления тубуса; 9 — винт для фиксации револьвера; 10 — револьвер; 11 — объективы; 12 — предметный столик; 13 — конденсор; 14 — стопорный винт конденсора; 15 - рукоятка ирисовой диафрагмы; 16 - винт для перемещения конденсора; 17 — зеркало; 18 — микрометрический винт; 19 — стопорный винт верхней части столика; 20 — центрировочный винт для установки препарата

Столик микроскопа имеет боковые винты, позволяющие передвигать аппарат в разные стороны. Под столиком находится конденсор — система линз. Конденсор поднимают вровень со столиком при работе с иммерсионной системой и опускают ниже при работе с объективами со средним и слабым увеличением. Конденсор имеет ирисовую диафрагму, позволяющую регулировать освещение. При работе с иммерсионной системой диафрагму полностью открывают. Ниже конденсора находится плоское — вогнутое вращающееся зеркало. Днем окрашенные препараты освещают с помощью плоского зеркала, при слабом освещении пользуются вогнутым зеркалом. После окончания работы тубус микроскопа поднимают, убирают препарат и чистой марлей, смоченной бензином, снимают иммерсионное масло. Микроскоп хранят в футляре или под стеклянным колпаком с целью защиты от загрязнений.

Специальные микроскопы имеют фазово-контрастное устройство, позволяющее четко видеть микроорганизмы и их внутреннее строение без окраски благодаря их различной оптической плотности.

Флуоресцентный микроскоп основан на исследовании микроорганизма в волнах света короткой длины, чаще в свете ультрафиолетовых лучей. Исследование проводят при сильном источнике света, например вольтовой дуге. Применяют светофильтры, не пропускающие видимый свет.

Бактерии обрабатывают особыми красками — флуорохромами. Для этого микроорганизмы промывают 2—3 раза прокипяченной водой для удаления питательной среды, готовят препарат, сушат при комнатной температуре, фиксируют на пламени спиртовки и красят несколько минут слабыми растворами флуоресцирующих красителей. После высушивания устанавливают препарат на предметный столик микроскопа и освещают коротковолновыми лучами. Наблюдают через окуляр с желтым светофильтром. Между источником света и зеркальцем микроскопа ставят синий светофильтр, пропускающий только лучи, возбуждающие флуоресценцию. При отсутствии микроба или других объектов, обладающих флуоресценцией, свет через фильтры не проходит, так как лучи, проникающие через первый фильтр, будут поглощаться вторым. При наличии флуоресцирующих объектов свет флуоресценции пройдет через оба светофильтра и сделает препарат видимым.

Электронный микроскоп дает возможность изучить мельчайшие частички, приближающиеся по размерам к молекуле белка. Вместо источника света в нем используются электроны вольфрамовой нити, а вместо оптических линз обычного микроскопа—электромагнитные. Для регулирования движения электронов имеются две катушки, создающие сильное электромагнитное поле. Они концентрируют и рассеивают электроны. Первая катушка выполняет роль окуляра, вторая — объектива. Изображения получают на специальном экране.

Приготовление красителей для микроскопического исследования

 

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *