Свежеполученный и высушенный пчелиный яд

Свежеполученный от живых пчел секрет ядовитых желез представляет собой густую, прозрачную жидкость горько-жгучего вкуса, кислой реакции (рН водных растворов 4,5-5,5), плотностью 1,08-1,13, быстро высыхающую на воздухе. Летучие вещества пчелиного яда —это вода и сложные эфиры: из о амилацетат, изоамил-пропионат, изоамилбутират и др. Считается, что в процессе ужа-ления выделяющиеся эфиры вызывают сигнальную реакцию «тревоги» в пчелиной семье и активируют других пчел к ужалению. Объем выделяющегося от одной пчелы секрета составляет около 1 мкл жидкости массой 0,5-1 мг. Секрет легко растворим в воде, заключает 12% нерастворимых примесей. Высушенный яд имеет вид прозрачной массы, составляющей 30-40% от нативного секрета, которая при размоле превращается в порошок от белого до желтоватого оттенка.

Высушенный пчелиный яд представляет собой многокомпонентную смесь из неорганических и органических веществ. Минеральные вещества, остающиеся после сжигания яда при температуре 500-800°С (зольность яда), составляют 2-4% сухой массы яда. В золе установлены кальций, фосфор, магний, медь, хлориды. Нет точных данных о присутствии в нативном без примесей яде таких распространенных в биологических тканях элементов, как калий и натрий.
Органические вещества яда представлены практически всеми группами соединений, встречающихся в животном организме — углеводы, жиры, белки, пептиды, аминокислоты, биогенные амины, ароматические и алифатические соединения и т.д. Установлено наличие в яде 2-6% Сахаров (глюкоза, фруктоза). Однако чем меньше загрязняется секрет при получении, тем меньше содержание углеводов. Жироподобные вещества имеются в яде в еще меньших концентрациях и составляют 1-3%. Около 1% яда составляют свободные аминокислоты.


Основная часть сухого вещества яда представлена белками и пептидами—около 80%. Все они являются активными веществами. Благодаря современным методам выделения и анализа сегодня идентифицировано 98% компонентов пчелиного яда. Выделение отдельных компонентов яда является достаточно сложной и трудоемкой задачей. Это связано с тем, что яд состоит из сложной смеси высокомолекулярных белков, полипептидов и низкомолекулярных компонентов в различных количествах. Так, присутствие пептида мелиттина в яде в количестве 40-50% от всего секрета затрудняет выделение компонентов, имеющих примерно равную молекулярную массу, но присутствующих в количествах, менее 1%. Тем не менее, эти задачи успешно решаются с применением различных методических приемов разделения, основанных на разных физико-химических свойствах компонентов. Так, используя электрофорез, разделяют компоненты яда в электрическом поле, основываясь на величине и полярности зарядов молекул. Метод гель-фильтрации позволяет фракционировать яд по молекулярной массе. При этом используют пропускание раствора яда через колонки, наполненные высокогидрофильными декстранами (сефадексы) или полиак-риламидными гелями. Они хорошо набухают в воде, образуя гели, которые действуют подобно молекулярному ситу. Величину «ячеек сита» подбирают, используя разные типы сефадексов и биогелей. Ионообменная хроматография позволяет разделить белки яда в соответствии с зарядами их функциональных групп, обладающих тем или иным сродством к полимерным смолам, через которые пропускается раствор яда.
В последние годы для разделения пептидов пчелиного яда широко применяется высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Разделение проводится с помощью специального жидкостного хроматографа, в комплект которого входят: колонки, заполненные специальным образом носителями — силикагелем или силикагелем с обращенной фазой; насос, позволяющий создавать давление до 200 атм., градиентный смеситель и высокочувствительный детектор. Проходящий через колонку под большим давлением раствор яда в определенных растворителях разделяется на фракции соответственно гидрофильности и гидрофобности молекул, т.е. их способности в той или иной степени удерживаться гидрофобными частицами носителя. Следует отметить, что для более детального анализа часто применяется не один, а несколько методов разделения, следующих последовательно. Например, фракцию, полученную после гель-фильтрации или ионообменной хроматографии, дальше анализируют методом ВЭЖХ.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *