Исследование подопытных насекомых

Исследование подопытных насекомых. 1. Произвести посевы из насекомого. 2. Зафиксировать и вскрыть больное насекомое.

Оборудование и материалы: зараженные пчелы или другие насекомые, 1%-ный раствор йодной настойки, ватные тампоны, стерильные пипетки для взятия гемолимфы, бинокулярные лупы, препаровальные иглы, ванночки, скальпели, пинцеты, булавки, пипетки с резиновой грушей, органическое стекло, растворенное в хлороформе.

Микробиологическое исследование. Больных и погибших насекомых подвергают микробиологическому исследованию. Из их тканей и органов производят высевы на питательные среды и готовят мазки для микроскопии. Патогенные микроорганизмы легче выделять из больных, еще живых насекомых и труднее — из погибших, подвергшихся разложению. При высевах из живых пчел материал для посева берут из гемолимфы и внутренних органов. Такие же вытевы делают из контрольных насекомых. Место взятия (брюшко, грудь) предварительно дезинфицируют йодной настойкой.

Гемолимфу берут капиллярной или тонкой пастеровской пипеткой из брюшка с дорзальной (спинной) стороны, прокалывая сочленения между тергитами. При посеве из мышц делают при соблюдении стерильности надрезы хитина с дорзальной стороны груди насекомого. Взятый материал засевают на плотные питательные среды. Из тех же тканей и органов делают мазки па предметные стекла.

Нередко производят высевы и мазки из внутренних органов: мальпигиевых сосудов, половых органов, желез и пр. Для этих целей насекомое предварительно обильно обмывают стерильным физраствором, затем погружают в этиловый спирт и снова обмывают стерильным солевым раствором, после этого фиксируют и вскрывают.

Фиксация насекомых. На середину дна сухой стерильной чашки Петри наносят каплю растворенного в хлороформе плексигласа (органического стекла). В эту каплю сразу кладут насекомое, слегка прижимают стерильной иглой и держат так около полминуты до загустения жидкости. Затем оставляют насекомое на 5-7 мин до подсыхания органического стекла. Насекомое будет прочно закреплено. Фиксируют насекомых и путем погружения их конечностей в слегка расплавленную смесь воска и парафина (смесь заранее наливают в стерильную чашку Петри). Можно фиксировать на лейкопластыре или изоляционной ленте, погружая ножки, брюшко и грудь насекомого в клейкую массу. Ленту лейкопластыря прикрепляют ко дну ванночки. Можно фиксировать насекомых и булавками, которыми пронзают голову и заднюю часть брюшка насекомого. Булавки вставляют в сильно наклоненном положении, с тем чтобы они не мешали вскрытию насекомого.

Вскрытие. Скальпели берут малых размеров цельнометаллические, предназначенные для глазных операций. Они должны быть острыми. Их точат на мелкозернистом бруске, смоченном водой. Хорошо отточенный скальпель правят на оселке с добавлением капли масла. Окончательную правку скальпеля производят на бритвенном ремне. После работы скальпель снова точат, правят, насухо вытирают и лезвие обертывают ватой.

Ножницы препаровальные берут небольшие, глазные, острые. Режущие части ножниц должны быть тонкими, прочными, острыми и соприкасающимися на всем своем протяжении. Концы при сжатии ножниц должны быть одинаковой длины и не заходить один за другой. Разборные ножницы удобнее, так как легко подвергаются вытиранию и просушиванию, После работы их разбирают и тщательно вытирают.

Пинцеты должны быть небольшие, остроконечные, легко поддающиеся сжатию. С помощью пинцета захватывают, приподнимают и удаляют наружные покровы, отделяют органы, переносят нужные объекты на предметное стекло и пр.

Препаровальные иглы применяют обычные, копьевидные и лопатовидные. Они также должны быть острыми с металлическими иглодержателями. Обычно иглы легко можно приготовить самому из ученических ручек и швейных иголок. С ученической ручки удаляют металлическую часть, предназначенную для держания пера. В центр деревянной ручки с помощью клещей вставляют тупым концом швейную иголку. Обычные иглы остро оттачивают напильником, а затем на бруске так, чтобы профиль их от середины иглы до конца спускался конусообразно.

Пипетки с резиновыми грушами применяют для промывания струей воды внутренних органов, их используют также для смены водно-солевого раствора и пр.

Булавки для прикалывания изучаемых объектов ко дну ванночки должны быть тонкими и острыми. После окончания работы весь инструментарий заново оттачивают, моют, насухо вытирают и хранят в сухом месте. Перед началом работы инструментарий стерилизуют в стерилизаторе.

Вскрытие насекомых производят стерильным инструментом в стерильном солевом растворе; у насекомого отрезают крылья и надкрылья. Ножницами с боков, начиная с заднего брюшного конца до переднего конца брюшка, а иногда и до головы, надрезают брюшные покровы, затем делают поперечные надрезы у первого сегмента брюшка или позади головы и у заднего конца брюшка; покров, начиная с заднего конца, осторожно поднимают пинцетом и отпрепаровывают скальпелем, препаровальным копьем или иглами.

Препарируют насекомое под препаровальной лупой при сильном падающем или проходящем свете. При падающем свете исследуют непросвечивающиеся объекты, а в проходящем — просвечивающиеся.

Отпрепарованная дорзальная хитиновая часть брюшка с внутренней стороны имеет сердце. При первых надрезах покровной ткани насекомого гемолимфа вытекает наружу.

После удаления с брюшка хитинового покрова сверху и в пространствах между органами видна рыхлая зернистая ткань — жировое теле. Трахейная система у взрослых насекомых представлена двумя расположенными вдоль брюшка воздухоносными мешками. От них отходят разветвления — трахеи и трахеолы. Трахеи имеют спиралевидное строение. Наполненные воздухом, они имеют в воде серебристо-белый цвет. При проникновении в них воды они становятся прозрачными. Мелкие разветвления трахей и трахеол пронизывают каждый орган членистоногого. Основные стволы группы трахей исследуют под бинокулярной лупой или при слабом увеличении микроскопа.

После удаления жирового тела в задней части брюшка открываются половые органы самца и самки, становится видной пищеварительная система, представляющая объемистую трубку с расширениями. От головы через грудь идет пищевод, затем пищеварительный желудок, мальпигиевы сосуды, задняя кишка. Пищеварительный желудок наиболее часто подвержен изменениям под влиянием инфекционных и инвазионных болезней.

Нередко исследуют у насекомых только одну пищеварительную систему. В таких случаях кишечник извлекают у него без вскрытия. Насекомое наркотизируют или умерщвляют путем сдавливания пальцами грудной части. Затем берут за спинку большим и указательным пальцами левой руки так, чтобы ножки были направлены вверх, а брюшко — в сторону правой руки и пинцетом, находящимся в правой руке, захватывают с боков последний сегмент брюшка. Извлечение кишечника у гусениц производят так: отрезают голову и последний сегмент. Затем захватывают пинцетом кишечник и извлекают его.

Кишечник мелких насекомых (тлей) извлекают на предметном стекле, помещенном на темном фоне, извлечение кишечника производят в капле физраствора. Головной конец тли придерживают шпателем. Иглой или препаровальным копьем отделяют брюшко и извлекают кишечник. Таким же путем можно извлекать слюнные железы.

 

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *